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產(chǎn)品展示   Products細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞細(xì)胞專用培養(yǎng)基>>兔原代骨髓肥大細(xì)胞專用培養(yǎng)基
 
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產(chǎn)品名稱:
兔原代骨髓肥大細(xì)胞專用培養(yǎng)基
產(chǎn)品型號(hào):
產(chǎn)品報(bào)價(jià):
1
產(chǎn)品特點(diǎn):
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  兔原代骨髓肥大細(xì)胞專用培養(yǎng)基的詳細(xì)資料:

商品描述:

兔原代骨髓肥大細(xì)胞專用培養(yǎng)基

產(chǎn)品名稱

兔原代骨髓肥大細(xì)胞專用培養(yǎng)基

規(guī)格

100mL/500mL

用途

僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

貨號(hào)

EY-XP5315

兔原代骨髓肥大細(xì)胞專用培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化,經(jīng)過長(zhǎng)期測(cè)試,本產(chǎn)品可保持兔原代骨髓肥大細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含兔原代骨髓肥大細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分,無需添加任何成分,可直接用于兔原代骨髓肥大細(xì)胞的培養(yǎng)。

產(chǎn)品主要成分

名稱

體積

濃度

保存條件

原代肥大細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基

500mL

4℃、避光

原代肥大細(xì)胞培養(yǎng)添加劑

5mL

100×

-20℃、避光

胎牛血清(FBS)

25mL

終濃度5%

-20℃、避光

雙抗(青霉su/鏈霉su,P/S)

5mL

100×

-20℃、避光

 

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸:放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法:按照對(duì)應(yīng)保存條件保存12個(gè)月,配置好的培養(yǎng)基2℃~8℃,保存2個(gè)月;

質(zhì)量控制

檢測(cè)項(xiàng)目

質(zhì)量控制

澄清度

澄清

PH

7.3±0.2

內(nèi)毒素含量 (EU/mL)

≤10

無菌檢測(cè)

細(xì)菌

陰性

真菌

陰性

支原體

陰性

細(xì)胞生長(zhǎng)試驗(yàn)

細(xì)胞形態(tài)

正常

細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)

合格



兔原代骨髓肥大細(xì)胞專用培養(yǎng)基

注意事項(xiàng):
兔原代骨髓肥大細(xì)胞專用培養(yǎng)基
僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì),請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部;這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,如有接觸,立即用自來水沖洗即可。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
兔原代骨髓肥大細(xì)胞專用培養(yǎng)基

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

冷凍保存細(xì)胞之方法?

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

兔原代骨髓肥大細(xì)胞專用培養(yǎng)基

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操作要點(diǎn):

兔原代骨髓肥大細(xì)胞專用培養(yǎng)基
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)解凍,使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。

5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。



產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 兔原代骨髓肥大細(xì)胞 專用培養(yǎng)基
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